ホウレンソウ（Spinacia oleracea L.）種子のαグルコシダーゼの精製とその性質

Four molecular forms of α-glucosidase were isolated from spinach seeds by several kinds of chromatography. The molecular masses of α-glucosidases Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,and Ⅳ were 78,78,82 and 82kDa by SDS-PAGE, and 62,62,190,and 70kDa by gel filtration, respectively. α-Glucosidases Ⅰand Ⅱ showed similar enzymatic properties. The Km for soluble starch was about 10 times lower than that for maltose, and they had higher activity not only towards malto-oligosaccharides but also towards α-glucans. The optimum pH was 4.5-5.5 and about 50% of the activity remained after incubation at 71℃ for 20 min. On the other hand, α-glucosidases Ⅲ and Ⅳ showed similar enzymatic propreties. The Km for maltose was 3-4 times lower than for solble starch, and they had high activity toward malto-oligosaccharides but faint activity towards α-glucnas. The optimum pH was 4.5-5.0 and no activity was found after incubation at 70℃ for 20 min. However, anti-α-glucosidase Ⅲ serum precipitated specifically with α-glucosidase Ⅲ.

α－グルコシダーゼの分子多型が各種クロマトグラフィーによりホウレンソウ種子から単離された。α－グルコシダーゼⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳの分子量は、それぞれSDS－PAGEにより78、78、82、82kDA、ゲル濾過のより62,62,190、70kDであった。α-グルコシダーゼⅠとⅡは、可溶性デンプンを基質とした際のKm値がマルトースよりも約10倍低く、さらに、α－グルカンだけでなくマルトオリゴ糖に対しても高い活性を示すことから、同じような酵素的特性を持つことが示された。最適pHは4.5ｶﾗ5.5を示し、温度安定性は70℃、20分処理で約50％の残存活性を示した。一方、α－グルコシダーゼⅢとⅣは、マルトースを基質とした際のKm値が可溶性デンプンよりも3－4倍低い値を示し、マルトオリゴ糖に対しては高い活性を示すが、α－グルカンに対してはほとんど活性を示さないことから、同じような酵素的特性を有することが示された。最適pHは4.5－5.5、そして70℃、20分処理では活性が認められなかった。しかしながら、抗α－グルコシダーゼⅢ血清は、α－グルコシダーゼⅢに対してのみ特異的に沈降線を形成した。