Transformation of Mutualistic Fungal Acremonium Endophyte

Conditions have been developed for transforming protoplasts of the Acremonium endophyte by PEG 4000 and electroporation. Transformation by PEG exhibited a higher number of transformants than by electroporation. lntegration of iaaM gene into the genome was examined by PCR and Southern blot hybridization analysis. PCR product showed that transformants banded at around 1.7 kb corresponding to the size of iaaM gene. Hybridization of the digests of genomic DNA with iaaM gene as DNA probe showed that the number of hybridized band signals was different between transformant and non-transformant. These results might indicate that PEG is an effective method for the transformation of Acremonium endophyte and that there are repeated copies of the iaaM homologous sequences in the genome of Acremonium.

アクレモニウムエンドファイトの形質転換の条件を検討した。アクレモニウムエンドファイトからプロトプラストを調製し、PEG4000とエレクトロポレーションを用いて形質転換を試みた。その結果、PEGで形質転換すると、エレクトロポレーションによる場合よりも多くの形質転換体が得られた。PCR解析によってiaaM遺伝子のゲノムへの導入を確認したところ、形質転換体のPCR産物はiaaM遺伝子のサイズに相当する約1.7kbのバンドを持っていた。一方、iaaM遺伝子をプローブとしたサザンブロット解析においては、形質転換体と非形質転換体の間にはハイブリダイズした断片数に違いがあることが明らかとなった。以上の結果は、アクレモニウムエンドファイトの形質転換にはPEG法が有効であること、アクレモニウムエンドファイトのゲノム中にはiaaM遺伝子様配列の反復コピーが存在することを示唆している。